Virusisolering är en avgörande process inom virologiforskning, klinisk diagnostik och vaccinutveckling. En kyld centrifug spelar en viktig roll i denna process, vilket möjliggör separering av viruspartiklar från andra komponenter i ett prov. Som leverantör av kylda centrifuger av hög kvalitet är jag välkänd i procedurerna för att använda dessa instrument i virusisolering. I den här bloggen kommer jag att leda dig genom de specifika stegen.
1. Provförberedelser
Innan den kylda centrifugen för virusisolering använder är korrekt provberedning väsentlig.
Samling av prover
Det första steget är att samla in lämpliga prover. Dessa kan inkludera biologiska vätskor som blod, saliv eller vävnadshomogenater. I fallet med andningsvirus används till exempel nasopharyngeala vattpinnar. Vid insamling av prover bör strikta aseptiska tekniker följas för att förhindra kontaminering.
Homogenisering (vid behov)
Om provet är en vävnad kan det behöva homogeniseras för att frigöra viruspartiklarna. EnHomogenisatorblandarekan användas för detta ändamål. Homogenisering bryter ner vävnadsstrukturen och säkerställer att viruset är jämnt fördelat i suspensionen. Efter homogenisering filtreras provet vanligtvis genom ett fint nätfilter för att ta bort stort skräp.
Tillägg av buffertar
Lämpliga buffertar läggs till i provet för att bibehålla pH och osmotisk balans. Dessa buffertar kan också innehålla proteashämmare för att förhindra nedbrytning av virusproteiner. Valet av buffert beror på vilken typ av virus isoleras och de efterföljande analysmetoderna.
2. Laddar den kylda centrifugen
När provet är beredd är det dags att ladda det i den kylda centrifugen.
Välja rätt rotor
Det första steget i att ladda centrifugen är att välja lämplig rotor. Olika rotorer har olika kapaciteter och är utformade för specifika typer av prover och separationskrav. För virusisolering kan en fast vinkelrotor eller en svängande - hinkrotor användas. Fixade vinkelrotorer är mer lämpliga för pelletering av viruspartiklar, medan svängande - hinkrotorer är bättre för densitetsgradientcentrifugering.
Balansera proverna
Balansering är ett kritiskt steg för att använda en centrifug. Obalanserade belastningar kan orsaka överdriven vibrationer, skada centrifugen och leda till felaktiga resultat. Prover ska placeras i rör av samma storlek och fyllas till samma volym. Vid behov kan dummyrör fyllda med en lika stor volym buffert användas för att balansera lasten.
Laddar rören
Lägg försiktigt de balanserade rören i rotorplatserna. Se till att rören är ordentligt sittande och säkrade. Dra åt rotorlocket för att förhindra läckage under centrifugering.
3. Ställa in centrifugeringsparametrarna
Nästa steg är att ställa in lämpliga centrifugeringsparametrar på den kylda centrifugen.
Hastighet
Hastigheten för centrifugering bestäms av viruspartiklarnas storlek och densitet. Generellt krävs högre hastigheter för mindre viruspartiklar. För vanligaste virus används hastigheter från 10 000 till 30 000 varv per minut (varv / minut). För mycket små virus eller för densitetsgradientcentrifugering kan emellertid ännu högre hastigheter vara nödvändiga.
Tid
Varaktigheten för centrifugering beror också på viruset och separationsmetoden. Kortare centrifugeringstider används för initiala förtydligande steg, medan längre tider krävs för att pelletera viruspartiklarna. Vanligtvis kan centrifugeringstider sträcka sig från några minuter till flera timmar.
Temperatur
Eftersom många virus är känsliga för temperaturen, används en kyld centrifug för att upprätthålla en låg temperatur under centrifugering. Temperaturen ställs vanligtvis mellan 2 - 8 ° C för att förhindra inaktivering av viruset.
4. Centrifugeringsprocess
När parametrarna är inställda startar centrifugeringsprocessen.
Övervakning av centrifugen
Under centrifugering är det viktigt att övervaka centrifugen för att säkerställa att den går smidigt. Kontrollera om ovanliga ljud eller vibrationer, som kan indikera en obalanserad belastning eller ett mekaniskt problem. De flesta moderna kylda centrifuger är utrustade med sensorer och larm för att upptäcka sådana problem.
Slutförande av centrifugering
När centrifugeringen är klar stoppar centrifugen automatiskt. Vänta tills rotorn ska komma till ett fullständigt stopp innan du öppnar centrifuglocket. Detta är viktigt för att förhindra spill eller skada på proverna.
5. POST - Centrifugeringshantering
Efter centrifugering måste proverna hanteras noggrant för att få det isolerade viruset.
Separation av supernatanten och pelleten
Om syftet med centrifugering var att pelletera viruspartiklarna, ta bort försiktigt supernatanten från röret med en5000UL Micropipette. Supernatanten innehåller de lösliga komponenterna och skräp, medan pelleten längst ner i röret innehåller viruspartiklarna.
Pellets resuspension
Viruspelleten återsuspenderas sedan i en liten volym buffert. Detta steg kräver mild pipettering för att undvika att skada viruspartiklarna. Det resuspenderade viruset kan renas eller analyseras ytterligare.
Kvalitetskontroll
Det är viktigt att utföra kvalitetskontroll på det isolerade viruset. Detta kan inkludera mätning av viruiter med användning av tekniker såsom plackanalyser eller kvantitativ polymeraskedjereaktion (QPCR). EnFuktanalysator för matKan också användas för att säkerställa korrekt fuktinnehåll i proverna under lagring.
6. Lagring av det isolerade viruset
Korrekt lagring av det isolerade viruset är avgörande för att upprätthålla sin livskraft.
Frysning av viruset
Det isolerade viruset frystes vanligtvis vid ultra -låga temperaturer, såsom - 80 ° C eller i flytande kväve. Frysning hjälper till att bevara viruset för långvarig lagring. Det är emellertid viktigt att lägga till kryoprotektmedel till virussuspensionen för att förhindra skador under frysprocessen.
Märkning och dokumentation
Varje virusprov bör märkas korrekt med information såsom provnamn, datum för isolering och virustyp. Dokumentation av isoleringsprocessen, inklusive centrifugeringsparametrarna och kvalitetskontrollresultaten, är också avgörande för framtida referens.
Slutsats
Att använda en kyld centrifug i virusisolering innebär en serie brunn definierade steg, från provberedning till post -centrifugeringshantering och lagring. Som leverantör av kylda centrifuger förstår vi vikten av att tillhandahålla instrument av hög kvalitet som kan uppfylla de specifika kraven för virusisolering. Våra centrifuger är utformade med avancerade funktioner som exakt temperaturkontroll, höghastighetsfunktioner och användar - vänliga gränssnitt för att säkerställa korrekt och effektiv virusisolering.
Om du är involverad i virusisoleringsforskning eller diagnostiskt arbete och letar efter en tillförlitlig kylskåp, skulle vi gärna hjälpa dig. Vårt team av experter kan ge dig detaljerad information om våra produkter och hjälpa dig att välja rätt centrifug för dina behov. Kontakta oss idag för att starta en upphandlingsdiskussion och ta ditt virusisoleringsarbete till nästa nivå.
Referenser
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Molekylärbiologi i cellen. Garlandvetenskap.
- Mahy, BWJ, & Van Regenmortel, MHV (red.). (2009). Desk Encyclopedia of General Virology. Academic Press.
- Murphy, FA, Fauquet, CM, Bishop, DHL, Ghabrial, SA, Jarvis, AW, Martelli, GP, ... & Zerbini, FM (2012). Virus taxonomi: nionde rapport från den internationella kommittén för taxonomi av virus. Elsevier.