Inom kemi, biologi och medicin är en pipett ett typiskt laboratorieinstrument som används för att leverera en förutbestämd volym vätska, ofta som en mediadispenser. Framgången för dina pipetteringsresultat beror på hur noggrant du läser av pipettvolymen när du utför känsliga studier. Att använda korrekt instrumentering av hög kvalitet är det bästa sättet att säkerställa att pipettvolymerna läses korrekt. Eftersom laboratoriekraven för noggrannhet och precision fortsätter att öka, är förståelse och perfektion av ideala pipetteringstekniker avgörande.
Pipetter används i vetenskaplig forskning och kräver hög precision för att korrekt mäta och överföra små mängder vätska.
Emellertid kan utrustningsfel eller operatörsfel vara orsaken till pipettmätningsfel. Eventuella förändringar i den dispenserade volymen kan ha en inverkan på resultaten och reproducerbarheten av experiment, såsom de för qPCR.
Faktorer som påverkar pipettnoggrannheten:
Temperatur
Noggrann pipettering påverkas i hög grad av temperaturen. Temperaturskillnaden mellan leveransanordningen och vätskan är den mest inflytelserika faktorn. De fallspecifika effekterna av termisk expansion uppstår i luftgapet (död luftvolym) mellan vätskeytan och kolven. Detta kan bland annat minska eller öka mängden vätska som dras in i spetsen.
Densitet
Mängden vätska som dras in i spetsen påverkas av densiteten (massa/volymförhållande). Mindre tätare vätska aspireras än en liknande procedur med vatten. För mindre täta vätskor är resultaten motsatta. Detta orsakas av den flexibla döda luftvolymen och jordens gravitation. Vätskedensiteten ändras också med temperaturen. Vanligtvis ändras också en vätskas densitet med temperaturen. Vid 20 grader /68 grader F har vatten vanligtvis en densitet på 0,998 kg/dm3, etanol har en densitet på 0,79 kg/dm3 och svavelsyra (95-98% h2SO4) har en densitet på 1,84 kg/dm3.
Hög
Noggrannheten påverkas av lufttrycket och geografisk höjd. Ju högre höjd, desto lägre lufttryck och desto lägre omvandlingsfaktor.
Dessutom sjunker kokpunkterna för vissa vätskor avsevärt till nära rumstemperatur, vilket ökar avdunstningsförlusterna kraftigt.
Reagensavdunstning
Mycket flyktiga reagens absorberar ånga, som kommer in i spetsen och höjer det inre trycket. Därför uppstår fel när vätska pressas ut på grund av ökat tryck.
Felaktigt pipetteringsläge valt
Under pipettering fattar operatörer ofta slumpmässiga eller subjektiva beslut om huruvida de ska använda bakåt- eller framåtläge. Viskösa prover bör dock vara de enda som använder omvänt läge. I omvänt läge är kolven helt nedtryckt (förbi det första stoppet) för att aspirera provet, och sedan endast delvis nedtryckt (till det första stoppet) för att leverera provet. Därför kommer användning av framåtläge med viskösa vätskor att resultera i underleverans, medan användning av omvänt läge med vattenlösningar kommer att resultera i överleverans.
Tilt pipettering
Provförlust uppstår när pipettspetsen kommer i kontakt med behållarens vägg under aspiration. Vid pipettering av små volymer kan dessutom om pipetten dras tillbaka i en vinkel orsaka volymförändringar på grund av ytspänningseffekter. Att dra pipetten direkt från behållaren minskar felen.