I cellodlingsexperiment används pipetter mycket ofta, och noggrannheten i deras operation påverkar direkt tillförlitligheten och repeterbarheten hos experimentella resultat. Följande är några tips för pipettoperation i cellkulturen, vilket jag hoppas kommer att vara till hjälp för ditt experiment.
1. Välj rätt pipett och tips
- Val av pipett: Välj rätt pipett beroende på vätskevolymen som ska överföras. Det normala driftsvolymområdet för de flesta pipetter är 10-100% av det angivna intervallet. Försök att undvika att ställa in en pipettvolym till mindre än 10% av den maximala volymen och använd en liten räckvidd för pipetteringsoperationer med små volym.
- Tipsval: Välj ett tips som matchar pipetten och se till att spetsen är tätt in för att undvika luftläckage. För specifika experiment (såsom aseptisk drift) bör autoklaverade spetsar väljas.
2. Skölj spetsen
Skölj spetsen 2-3 gånger för att bilda en homogen film i spetsen och därmed förbättra riktigheten vid pipettering. Dessutom kan det neutralisera kapilläreffekten i mikropipetter, vilket kan göra temperaturen inuti spetsen i överensstämmelse med provtemperaturen för storvolympipettering. Det bör noteras att sköljning kan ha en negativ inverkan på resultaten vid pipettering av heta och kalla lösningar.
3. Kontrollera hastigheten på aspiration och dispensering
- Slät tryckning: Tryck och släpp kontrollknappen smidigt och kontinuerligt, snarare än att trycka och släppa den plötsligt. Detta kan undvika bildning av bubblor och förbättra riktigheten vid pipettering.
- Paus: Efter att ha sugat vätskan, lämna spetsen i vätskan i cirka 1 sekund, särskilt för de viskösa vätskorna. Omedelbart att dra ut spetsen kan resultera i ofullständig flytande aspiration.
4. Var uppmärksam på spetsens nedsänkningsdjup
- Mikropipette: spetsen ska nedsänktes 2-3 mm.
- Stora pipetten: Fördjupningsdjupet ska vara 5-6 mm. Om spetsen är nedsänkt för djup kommer luften inuti spetsen att komprimeras, vilket gör att för mycket vätska sugs. Vätska som återstår på spetsens yta kan också påverka resultaten.
5. Vertikal operation
Fördjupa pipetten i provet så vertikalt som möjligt, helst utan att avvika från det vertikala läget med mer än 20 grader. Förutom att förbättra pipettvolymens noggrannhet kan detta också förhindra att vätskan strömmar in i pipetten på grund av överdriven lutning.
6. Observera pipettspetsen
När du förbereder sig för att ladda ut vätskan, var uppmärksam på om det finns överskott av droppar fästa vid ytan på pipettspetsen. Efter utsläpp av vätskan kan spetsen på pipettspetsen beröras till sidan av behållaren för att säkerställa att utloppet är tillräckligt noggrant för att förhindra att den sista droppen vätska förblir på spetsen av pipettspetsen.
7. Välj lämplig pipetteringsmetod
- Positiv sugmetod: Lämplig för de flesta vätskor. När du suger vätska trycker du på knappen till den första stopppunkten och släpp sedan långsamt knappen för att återgå till startpunkten. Tryck sedan på knappen till den första stopppunkten för att ladda ut vätskan, pausa ett tag och fortsätt att trycka på knappen till den andra stopppunkten för att blåsa ut den återstående vätskan. Slutligen släpp knappen.
- Bakåt sugmetod: Lämplig för mycket viskösa vätskor, biologiskt aktiva vätskor, lätt skummande vätskor eller extremt små mängder vätskor. Sug först mer vätska än setområdet och blåsa inte ut den återstående vätskan när du överför vätskan.
8. Håll pipetten ren och underhållen
- Regelbunden kalibrering: Efter att ha använt pipetten under en tid måste den kalibreras för att säkerställa dess noggrannhet.
- Rengöring: Efter varje användning bör pipetten rengöras i tid för att undvika restvätska från att förorena nästa experiment.
9. Aseptisk operation
I cellkultur är aseptisk drift mycket viktig. När du använder en pipett, var uppmärksam på följande punkter:
- Desinfektion: Torka av pipetten och spetsen med en alkohol bomullskula för desinfektion.
- Undvik korsföroreningar: Använd ett nytt tips för varje prov för att undvika korsföroreningar.
Med ovanstående tips kan du använda pipetter för cellodlingsexperiment mer exakt och effektivt och förbättra tillförlitligheten och repeterbarheten för experimentella resultat. Jag hoppas att dessa tips hjälper dig!